一、Rubicon和Qiagen單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增試劑盒的對(duì)比

參考：

1.The comparison of the performance of four whole genome amplification kits on ion proton platform in copy number variation detection. Xinyi Zhang et al.

2.Rubicon 資料，RB3050說明書.

3.Qiagen 資料，150343說明書.

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二、產(chǎn)品介紹

Rubicon PicoPLEX WGA Kit單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增試劑盒

單管，3步，PicoPlEX WGA試劑盒專門用于人單細(xì)胞和pg級(jí)DNA的擴(kuò)增，具有可重復(fù)性、低背景的特點(diǎn)。3小時(shí)內(nèi)完成細(xì)胞裂解、熱循環(huán)文庫制備和低背景擴(kuò)增，zui終能得到2-5µg擴(kuò)增DNA。

技術(shù)原理及特點(diǎn)

利用特殊隨機(jī)引物（Quasi-random primer）引發(fā)線性擴(kuò)增進(jìn)行全基因組擴(kuò)增。

相比于以往的PCR、MDA、MALBC為基礎(chǔ)的單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增技術(shù)，操作簡(jiǎn)單快速。擴(kuò)增zui大優(yōu)勢(shì)：再現(xiàn)性良好。

REPLI-g Single Cell Kit 單細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒

REPLI-g Single Cell Kit 單細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒采用MDA技術(shù)，可均一的擴(kuò)增單個(gè)細(xì)胞（1至1000個(gè)細(xì)菌或腫瘤細(xì)胞）或純化的基因組DNA，能夠覆蓋基因組所有位點(diǎn)。產(chǎn)量穩(wěn)定，可達(dá)40 µg（產(chǎn)物平均長(zhǎng)度大于>10 kb）。適用于二代測(cè)序等新技術(shù)應(yīng)用。可用于癌癥、干細(xì)胞或宏觀基因組學(xué)（metagenomics）研究。

技術(shù)原理及特點(diǎn)

REPLI-g Single Cell Kit 單細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒采用多重置換擴(kuò)增（MDA，Multiple Displacement Amplification）技術(shù)，對(duì)所有基因組位點(diǎn)進(jìn)行無偏差的擴(kuò)增。與基于PCR的全基因組擴(kuò)增技術(shù)相比，該技術(shù)具有更好的擴(kuò)增保真度，避免出現(xiàn)假陽性或假陰性信號(hào)。

多重置換擴(kuò)增(MDA)的恒溫基因組擴(kuò)增技術(shù)包含了隨機(jī)六聚體與變性DNA的結(jié)合過程，以及使用Phi 29聚合酶在恒定溫度下進(jìn)行的鏈置換合成過程。典型擴(kuò)增能夠生成40 µg以上的DNA產(chǎn)量，而不受起始模板量影響，這意味著在大多數(shù)應(yīng)用中無需進(jìn)行額外的DNA濃度檢測(cè)，既可直接進(jìn)行后續(xù)的遺傳學(xué)分析。

溫和的堿變性法

REPLI-g Kit采用溫和堿性孵育法，在DNA斷裂或去堿基化發(fā)生頻率非常低的情況下讓使其均勻地變性。這樣擴(kuò)增得到的DNA具有非常高的完整性，擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度達(dá)到zui大化，從而使基因組中的位點(diǎn)和序列都得以均勻呈遞。

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