Product category
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹:
本試劑盒適用于從多種植物中提取RNA,即便是從多糖多酚含量豐富的植物中也能成功提取高質(zhì)量的RNA,如水稻葉片、小麥葉片、玉米葉片、煙草葉、松針、銀杏葉、楊樹葉、石榴葉、冬青葉、蘋果、桃、梨、西紅柿、櫻桃、杏、香蕉、葡萄、枇杷、桂圓果皮、桂圓果肉、荔枝果皮、荔枝果肉、大豆等樣本。*的裂解液配方,可使細胞中的RNA酶迅速滅活,有效去除多糖多酚對RNA提取的影響,無需氯仿等試劑,同時采用硅基質(zhì)膜吸附RNA進行純化,提取的總RNA純度高,無基因組、蛋白質(zhì)和其它雜質(zhì)的污染,可用于Real Time RT-PCR、RT-PCR 、Northern Blot、Dot Blot、和體外翻譯等多種下游實驗。
產(chǎn)品名稱:康為世紀(jì) 植物RNA提取試劑盒 (DNase I)
產(chǎn)品貨號:CW2598S
產(chǎn)品組份:
操作步驟:
1.勻漿處理:取50-100mg植物組織在液氮中迅速研磨成粉末,加入500 μl Buffer RLS(使用前請先檢查是否加入β-巰基乙醇),立即渦旋劇烈震蕩混勻。
2.4°C 12,000 rpm(~13,400×g)離心2分鐘。
3.將上清液轉(zhuǎn)入已裝入收集管的過濾柱(Spin Columns FS)中,4°C 12,000 rpm離心1分鐘,小心吸取收集管中的上清并轉(zhuǎn)移至新的RNase-Free 離心管(自備)中,槍頭盡量避免接觸收集管中的細胞碎片沉淀。
4.緩慢加入0.5倍上清體積的無水乙醇,混勻(此時可能會出現(xiàn)沉淀),將得到的溶液和沉淀一起轉(zhuǎn)入已裝入收集管的吸附柱(Spin Columns RM)中,若一次不能將全部溶液加入吸附柱中,請分兩次轉(zhuǎn)入。4°C 12,000 rpm離心1分鐘,棄廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
5.向吸附柱RM中加入350 μl Buffer RW1,4°C 12,000 rpm離心1分鐘,棄廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
6.配制DNase I 混合液:取52 μl RNase-Free Water,向其中加入8 μl 10×Reaction Buffer和20 μl DNase I(1 U/μl),混勻, 配制成終體積為80 μl的反應(yīng)液。
7.向吸附柱中直接加入80 µl DNase I 混合液,20-30℃孵育15分鐘。
8.向吸附柱RM中加入350 μl Buffer RW1,4°C 12,000 rpm離心1分鐘,棄廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
9.向吸附柱RM中加入500 μl Buffer RW2(使用前檢查是否加入無水乙醇), 4°C 12,000 rpm離心1 分鐘,棄廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
10.重復(fù)步驟9。
11.4°C 12,000 rpm離心2分鐘。
12.將吸附柱RM裝入新的RNase-Free Centrifuge Tubes(1.5 ml)中,向吸附膜的中間部位懸空滴加30-50 μl RNase-Free Water,室溫放置2分鐘,4°C 12,000 rpm離心1分鐘,得到的RNA溶液保存在-70℃,防止降解。
相關(guān)知識:
從不同細胞中分離提取高純度、高質(zhì)量的RNA對于很多分子生物學(xué)實驗至關(guān)重要,如cDNA的合成、Northern印記分析、mRNA差別顯示技術(shù)分離基因以及轉(zhuǎn)錄組測序等等實驗,很大程度上取決于RNA的完整性。然而由于RNA自身結(jié)構(gòu)的特點,以及周圍環(huán)境中眾多而又穩(wěn)定存在的RNA酶,常常會使得RNA發(fā)生降解。在植物果實組織中,如玉米籽粒、柑橘、香蕉,含有豐富的多糖、蛋白,由于多糖與RNA在溶解性上高度一致,導(dǎo)致二者形成非常難溶的膠狀復(fù)合物,使得RNA提取量下降,并造成一定程度上的降解;在植物老化組織中,如玉米老葉、冬青葉、茶葉,含有大量的多酚,當(dāng)其氧化后,會使得RNA沉淀變成褐色,干擾了后續(xù)實驗;有些產(chǎn)生次生代謝組織,如葡萄、蘋果、甘蔗,其次生產(chǎn)物會降低RNA的獲取率。
產(chǎn)品訂購信息:
品牌 貨號 名稱 規(guī)格
康為世紀(jì) CW2598S OminiPlant RNA Kit (Dnase I) 50preps
產(chǎn)品名稱:康為世紀(jì) 植物RNA提取試劑盒 (DNase I)
產(chǎn)品貨號:CW2598S
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