產(chǎn)品介紹：　

  KAPA hgDNA定量&QC試劑盒，是基于SYBR Green I染料法優(yōu)化的高質(zhì)量qPCR檢測(cè)試劑盒，包含KAPA SYBR® FAST qPCR Master Mix預(yù)先稀釋的一系列DNA標(biāo)準(zhǔn)品，以及針對(duì)于人類基因組單拷貝的高度保守區(qū)域的不同位點(diǎn)所設(shè)計(jì)的引物預(yù)混液。最小片段所對(duì)應(yīng)的引物，用于獲得絕對(duì)定量的結(jié)果，而額外的引物，用于獲得在DNA樣本中可擴(kuò)增模板量(質(zhì)量高的核酸片段)的信息。這個(gè)試劑盒由此所產(chǎn)生的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(即Q-ratios)，可以用于預(yù)測(cè)文庫(kù)的產(chǎn)量，或者對(duì)于如FFPE DNA這類樣本質(zhì)量變化很大的樣本的工作流程進(jìn)行調(diào)整。

產(chǎn)品名稱：KAPA 人類基因組DNA定量及QC試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：KK4960

產(chǎn)品特點(diǎn)：

在單次檢測(cè)中，同時(shí)評(píng)估樣本量以及樣本質(zhì)量

可以將質(zhì)量分?jǐn)?shù)(Q-ratios)與測(cè)序相關(guān)指標(biāo)相關(guān)聯(lián)

高性能的KAPA SYBR FAST qPCR Master Mix

預(yù)先稀釋好的DNA標(biāo)準(zhǔn)品以及可以直接使用的引物

多功能、易于自動(dòng)化的工作流程

產(chǎn)品原理：

一組DNA標(biāo)準(zhǔn)品，使用三對(duì)不同引物，用于產(chǎn)生(最多)三組標(biāo)準(zhǔn)曲線。這三對(duì)引物的擴(kuò)增目標(biāo)，位于某高度保守、單拷貝的人類基因組位點(diǎn)，其大小分別為41 bp, 129 bp以及305 bp。41 bp檢測(cè)用于DNA樣品的絕對(duì)定量。對(duì)于評(píng)估DNA質(zhì)量，使用129 bp和/或305 bp引物預(yù)混液生成標(biāo)準(zhǔn)曲線并且檢測(cè)樣本。由于低質(zhì)量的DNA樣本的長(zhǎng)片段擴(kuò)增效率會(huì)大幅度降低，相對(duì)的DNA質(zhì)量可以通過(guò)41 bp檢測(cè)的濃度，對(duì)于129 bp或者305 bp檢測(cè)的濃度進(jìn)行均一化，或者在此DNA樣本中可被擴(kuò)增的物質(zhì)的量來(lái)進(jìn)行推測(cè)。這種通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化產(chǎn)生的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(值介于0和1之間)，可以用于指示DNA的質(zhì)量，或者在此DNA樣本中可被擴(kuò)增的物質(zhì)的量。

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：

對(duì)于稀釋后的DNA樣本進(jìn)行絕對(duì)定量

用附加的引物進(jìn)行定量分析，獲得的Q-ratio用于指示樣本的質(zhì)量

使用預(yù)期：

文庫(kù)的轉(zhuǎn)化率，為在Illumina測(cè)序平臺(tái)上進(jìn)行靶向重測(cè)序而制備

分別從樣本質(zhì)量參差的80-100 ng FFPE DNA樣本(橙色)和商用人類基因組DNA(灰色)，使用KAPA LTP文庫(kù)構(gòu)建試劑盒來(lái)構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)。FFPE DNA樣本在用Covaris打斷之前，用KAPA hgDNA定量&QC試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，然后按照Q-ratios(DNA質(zhì)量)沿X軸升序排列。Q-ratios如圖中標(biāo)注。片段化的DNA(平均大小在180 bp左右)在建庫(kù)之前，用Qubit® HS dsDNA (Life Technologies) 進(jìn)行定量；在連接接頭、形成文庫(kù)分子之后，使用基于qPCR的KAPA文庫(kù)定量試劑盒進(jìn)行定量。結(jié)果顯示，F(xiàn)FPE樣本的文庫(kù)轉(zhuǎn)化率(Conversion Rate，起始DNA分子轉(zhuǎn)化成連接有接頭的文庫(kù)分子的百分比，%)明顯低于高質(zhì)量的DNA樣本，使得FFPE樣本的文庫(kù)分子多樣性受到限制，并且需要在文庫(kù)擴(kuò)增步驟中采取更多的循環(huán)數(shù)才能得到足夠多的文庫(kù)分子進(jìn)行靶標(biāo)捕獲，從而使FFPE樣本的文庫(kù)的重復(fù)率(duplication rate) 更高，靶標(biāo)覆蓋率(target coverage)更低。

產(chǎn)品名稱：KAPA 人類基因組DNA定量及QC試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：KK4960

產(chǎn)品訂購(gòu)信息

品牌     貨號(hào)             名稱                                   規(guī)格

KAPA  KK4960  KAPA hgDNA定量和質(zhì)控試劑盒   300反應(yīng)

關(guān)于公司：

Kapa Biosystems位于美國(guó)馬薩諸塞州威爾明頓，是一家蛋白質(zhì)工程專家及基因組學(xué)工具供應(yīng)商，致力于研發(fā)、生產(chǎn)下一代測(cè)序（NGS）所需的生物酶及相關(guān)試劑，該公司基于直接分子進(jìn)化平臺(tái)開(kāi)發(fā)的產(chǎn)品已被廣泛用于DNA擴(kuò)增、測(cè)序、基因組學(xué)研究、分子診斷等領(lǐng)域。

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